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      重慶威斯騰轉化研究院擁有專業的技術團隊,先進的實驗設施和完善的SPF級動物房。動物房配備IVC和EVC飼養籠,同時擁有分子克隆、干細胞培養、遺傳工程模式生物基因組編輯、生理及病理分析等技術平臺,可為生命科學研究和藥物研發提供優質的基因工程模式生物活體模型以及表型分析檢測、模型品系保存、遺傳育種及繁育等服務。

      合作領域



      常用操作方法

      DNA原核顯微注射

      DNA原核顯微注射是指將外源DNA通過顯微注射的方法注射到受精卵的原核內,注射DNA整合到小鼠受精卵的基因組中,并穩定遺傳給后代。



      ES打靶技術

      ES打靶技術是使用小鼠胚胎干細胞(ES)結合同源重組技術制備基因改造小鼠。在小鼠的胚胎干細胞中,將外源DNA同源重組到靶向基因位點,以達到定點修飾基因的目的。通過篩選,將正確修飾的胚胎干細胞注射到小鼠囊胚,移植到代孕母鼠并生成嵌合體小鼠。最后通過與野生型小鼠交配得到具有生殖系遺傳的后代,從而獲得基因改造小鼠。


      完全性基因敲除鼠

      通過CRISPR /Cas9基因敲除技術,針對靶基因設計和構建gRNA與Cas9表達質粒,造成目的基因的功能區域被敲除,獲得全身所有的組織和細胞中都不表達該基因的小鼠模型。

      移碼突變鼠的建系原則與流程

      1、通過針對靶基因不同位點設計、構建相應的一對gRNA質粒,體外轉錄為RNA后,與Cas9 mRNA一起原核顯微注射獲得測序鑒定陽性的F0代雜合子鼠;

      2、F0代雜合子鼠與野生型鼠進行交配,獲得PCR鑒定陽性的F1代雜合子鼠;

      3、選擇來自同一只F0代鼠,基因型一致的F1代鼠,達到性成熟后互配,可獲得F2代鼠。對獲得的F2代鼠進行PCR及測序鑒定,理論上,F2代鼠中25%為純合子,50%為雜合子,25%為野生鼠。

      片段基因敲除鼠的建系原則與流程

      1、通過針對靶基因不同位點設計、構建相應的一對gRNA質粒,體外轉錄為RNA后,與Cas9 mRNA一起原核顯微注射獲得測序鑒定陽性的F0代雜合子鼠;

      2、F0代雜合子鼠與野生型鼠進行交配,獲得PCR鑒定陽性的F1代雜合子鼠;

      3、選擇來自同一只F0代鼠,基因型一致的F1代鼠,達到性成熟后互配,可獲得F2代鼠。對獲得的F2代鼠進行PCR及測序鑒定,理論上,F2代鼠中25%為純合子,50%為雜合子,25%為野生鼠。

      雙(多)基因敲除鼠的建系原則與流程

      1、通過針對兩個靶基因分別設計、構建相應的gRNA質粒,體外轉錄為RNA后,與Cas9 mRNA一起原核顯微注射獲得測序鑒定陽性的F0代多基因雜合子鼠;

      2、F0代雜合子鼠與野生型鼠進行交配,獲得PCR和測序鑒定陽性的F1代雙基因雜合子鼠;

      3、選擇雙基因雜合子鼠進行雜交,獲得F2代鼠。對獲得的F2代鼠進行PCR及測序鑒定。

      條件性基因敲除鼠

      條件性基因敲除通常利用“Cre-LoxP”系統實現。首先把兩個LoxP位點插入到目的基因的一個或幾個重要外顯子的兩端,以制備出有兩個Loxp位點的floxed小鼠。floxed小鼠在與表達Cre重組酶小鼠雜交之前,該基因正常表達;當floxed小鼠與組織特異性表達Cre酶的小鼠進行雜交后,可實現在特定的組織或細胞中敲除該基因,而在其它組織或細胞中該基因表達正常。

      建系原則與流程

      1、與野生型小鼠雜交:陽性CRISPR-Pro小鼠(+/flox)與野生型小鼠(+/+)雜交,獲得F1代雜合子小鼠(+/flox);

      2、挑選一對F1代雜合子小鼠(+/flox)進行自交,獲得F2代純合子小鼠(flox/flox)。

      報告基因(Reporter/Tag)小鼠模型

      指在目的基因的位置引入報告基因(如EGFP、mRFP、mCherry、mYFP或LacZ等)或標記基因的小鼠模型,通過報告基因的表達監控目的基因啟動子的轉錄活性、監控目的蛋白的表達定位及細胞轉運。

      人源化(Humanized)小鼠模型

      指帶有功能性的人類基因、細胞、組織或器官的小鼠模型,通常被用做人類疾病體內研究的活體替代模型。本服務內容涉及到的是指帶有功能性人類基因的小鼠模型。

      Rosa26位點基因敲入小鼠模型

      指在Rosa26位點引入某種基因的轉基因小鼠模型。傳統的轉基因小鼠一般通過利用質粒進行受精卵原核注射的方式來制備,通常會得到多個品系(Founders)。不同品系由于質粒在染色體上的整合位點不同、拷貝數不同,不同品系之間不容易得到一致的結果。而且由于轉基因小鼠傳代后,轉基因的拷貝數稀釋以及基因沉默等原因,同一品系的表型在傳代過程中也很容易丟失,造成實驗結果不能重復。現在大部分實驗室都是通過定點轉基因的方式來制備轉基因小鼠,其中用的最多的位點是Rosa26位點。

      條件性點突變小鼠模型-誘導性(Inducible)

      指在誘導劑的作用下,點突變能在特定的時間點被引入特定細胞或組織中目的基因位置的動物模型。誘導前表達野生型蛋白;誘導后,突變的蛋白在全身所有特定的細胞或組織中表達。

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