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       細胞系基因靶向操作服務


      細胞系基因靶向操作服務


      基因敲除敲入技術一直是研究特定基因功能的有效工具。威斯騰生物利用最新的CRISPR/Cas系統可以有效的實現對細胞系特定基因的敲除和定點突變。


      技術原理

      Clustered Regularly Interspaced Short PalindromicRepeats(CRISPR)/Cas是細菌和古細菌不斷進化而獲得的免疫防御機制,其中II型CRISPR/Cas免疫系統依賴Cas9內切酶家族靶向和剪切外源DNA。CRISPR/Cas9系統通過小導向RNA(sgRNA)對切割區域進行識別,進而利用Cas9內切酶實現靶向區域的切割以產生DNA雙鏈斷裂。該系統靈活簡單,可實現多個靶點的同時操作。目前我們采用Double Nicking技術,顯著降低脫靶率。
       
      我們利用該技術,定點敲除和修飾各種細胞系中的特定基因。對打靶細胞進行藥物篩選,利用CRISPR/Cas系統獲得的基因敲除細胞的剔除效率會明顯高于常規的利用RNAi和shRNA介導的基因敲落。

      技術特色
      1. 可實現多個靶基因位點及多個基因的同時敲除
      2. 最新Nickase酶/雙gRNA技術,顯著降低脫靶率
      3. 無種屬限制,適用于各種細胞系的靶向敲除
      4. 服務周期短,2個月即可交付陽性細胞

      服務內容
      靶向目標序列gRNA的設計及載體構建
      目標細胞系共轉染
      陽性細胞株的篩選和鑒定
       
      應用范疇
      基因功能分析:在細胞水平研究基因的功能
      定點突變::建立點突變細胞,可用于藥物靶點研究。
      啟動子功能分析:該方法建立的啟動子分析系統,可有效地分析內源性啟動子的強度,是一種最理想的分析系統。

      服務流程




      本平臺可制備的動物模型(部分)


      疾病方法動物模型成功率操作難度耗時程度
      帕金森疾病6-OHDA腦立體定位注射Rat70%~80%簡單比較耗時
      MPTP、IP或SC注射(急性or慢性)Mouse70%簡單快速
      抑郁癥禁食、禁水、夾尾、冰水等慢性不可知刺激Rat80%簡單非常耗時
      利血平藥物注射或者懸尾和強迫游泳Mouse60%簡單非常耗時
      脊髓損傷脊髓半切、全斷、牽張、擠壓、打擊等Rat80%普通非常耗時
      腦外損傷顱腦損傷儀打擊致損Rat80%普通比較耗時
      坐骨神經損傷
      (周圍神經損傷)
      切斷或者夾閉神經(手術)Rat90%簡單一般
      心肌缺血心臟冠狀動脈左前降支結扎Rat60%~70%較難非常耗時
      心力衰竭腹主動脈縮窄手術致心力衰竭Rat90%簡單快速
      肺動脈高壓手術分流術和MCT IP或SC注射Rat80%普通一般
      高血壓單腎單夾腎血管或者兩腎一夾型腎血管Rat80%簡單快速
      粥樣動脈硬化高脂飲食+VD3喂養Rat/Mouse50%簡單非常耗時
      大腦中動脈阻塞(MCAO)線栓法制備Rat 70%普通比較耗時
      慢性支氣管炎煙熏Rat80%簡單耗時
      過敏性哮喘OVA+氫氧化鋁致敏Rat/Mouse80%普通耗時
      肺炎模型鮑曼不動桿菌氣道滴注Rat/Mouse90%簡單快速
      肝炎—肝硬化—肝癌DEN誘導Rat80%簡單比較耗時
      肝纖維化CCL4誘導Rat80%簡單耗時
      膽結石模型喂養致石飼料Mouse90%簡單一般
      急性胰腺炎牛黃膽酸鈉胰膽管注射Rat90%普通快速
      急性腎衰竭順鉑尾靜脈注射/腎動脈缺血Rat80%普通一般
      體內血栓手術或者藥物誘導Mouse60-70%普通比較耗時
      關節炎模型Ⅱ型膠原+佐劑誘導Rat/Mouse90%簡單一般
      Ⅰ型和Ⅱ型糖尿病STZ或增加高脂飼料喂養藥物誘導Rat/Mouse80%簡單比較耗時
      荷瘤鼠/裸鼠成瘤皮下成瘤BALB/cA-nu mice90%簡單一般
      更多動物模型敬請咨詢

       

      【本平臺合作項目】

      分子生物學、細胞生物學、病理染色檢測、細胞敲除&敲入、模式與轉基因動物、SPF動物保種、免疫學檢測、影像學檢測、原代培養、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩轉株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產權服務!

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