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       Tunel(原位末端凋亡法)

                       

          原位末端凋亡法(Tunel)實驗技術

      一、TUNEL 技術簡介:

      TUNEL 技術, 即脫氧核苷酸末端轉移酶( Term inal2deoxynucleo t idyl t ran sferase, TdT )介導的x2dU TP 缺口末端標記(TdT 2m ediatedx2dU TP n ick end labeling, TUN EL ) 技術, 是目前原位檢測細胞凋亡最敏感、快速、特異的新方法, 已廣泛用于生物、醫學研究領域。

      TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL)是一種用來檢測細胞凋亡(apoptosis)的分析方法.細胞凋亡有一項重要的特征為細胞內的DNA會碎裂成片段(DNA fragmentation),TUNEL可以有效的去探測DNA片段的產生,所以可以傳達細胞凋亡的訊息.TdTterminal deoxynucleotidyl transferase,此種酵素可以在沒有DNA模板的情形下,連結核甘酸到DNA3'-OH.1992,以色列科學家Gavrieli等人將TdT引為為標定DNA片段的一個酵素,自此衍生出TUNEL此項技術.TUNEL的好處是可以在細胞凋亡發生的早期,即可偵測到DNA片段的產生,并且可以直接使用在組織切片上,觀察細胞凋亡發生的位置.所以TUNEL目前為廣泛接受與使用的一種細胞凋亡的分析方法


      二、試劑與儀器


      試劑

      1TUNEL試劑盒:購自羅氏公司

      2DABSigma

      3PBSTBS緩沖液:國藥集團


      儀器

      切片機:德國LeicaRM2145

      展片機:德國LeicaHI1210

      烤片機:德國LeicaHI1220


      三、操作流程

      1、石蠟切片,常規脫蠟至水; 石蠟切片4um貼在涂有切片粘合劑的載玻片上,58C24h,常規脫蠟至水,二甲苯Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ 各10分鐘,無水乙醇,95%85%75%乙醇,各2分鐘,水洗2分鐘。

      2、0.3%H2O2作用  30min,室溫,PBS3min×3次;

      3、Proteinase K 20ug/ml  37 20min

      4、PBS3min×3次;

      5、0.1%Triton×100 PBS3min×3次;

      6、PBS3min×3次;

      7、TUNEL混合液---1ml Tunel緩沖液中加入10ul  b-11-DUTP, 10ul  TDT, 37C  1h,室溫1h

      8、PBS3min×3次;

      9、Streptavidin-HRP  1:400  37C  30min

      10、PBS3min×3次;

      11、0.04%DAB+0.03%H2O2顯色10min,流水洗

      12、蘇木精襯染1min,鹽酸乙醇分化,水洗

      13、常規樹脂封片

       

      四、結果提供:陽性結果為棕黃色(核)或棕褐色,背景呈紫藍色。

      1、完整的實驗報告(包含試劑、耗材、操作步驟、病理結果);

      2、原始病理照片,一般提供100倍、400倍照片各2張;

      3、如果客戶提供的是組織,我們提供包埋、染色片

       

      五、樣本要求

      取材保持組織新鮮(組織塊以小于2cm*1.5cm*0.3cm為宜),立即放入固定液(固定液用10%福爾馬林液或4%多聚甲醛緩沖液,體積為組織塊的10倍以上)中,避免干燥;對于有血跡的樣本,可用PBS液或生理鹽水沖洗后直接放入固定液中;經固定后的樣本必須在48小時內處理


      結果展示 


      威斯騰實驗服務流程:



      威斯騰生物服務項目


      分子生物學檢測蛋白質與免疫學動物實驗
      實時熒光定量PCR單克隆抗體制備帕金森疾病模型
      免疫共沉淀(Co-IP)多克隆抗體制備抑郁癥動物模型
      ELISA(酶聯免疫吸附法)技術Western-blot 實驗服務脊髓損傷模型
      生化指標檢測蛋白雙向電泳實驗服務腦外損傷模型
      雙熒光素酶報告基因檢測原核蛋白表達純化骨神經損傷模型
      染色質免疫共沉淀(ChIP)真核蛋白表達純化心肌缺血模型
      GST pull DownITRAQ定量蛋白質組學心力衰竭模型
      SLAC蛋白組學肺動脈高血壓動物模型
      高血壓模型
      病毒包裝純化實驗課題整體外包粥樣動脈硬化模型
      過表達/干擾慢病毒包裝純化整體課題外包大腦中動脈阻塞模型
      過表達/干擾腺病毒包裝純化細胞整體實驗外包慢性之氣管炎模型
      逆轉錄病毒包裝純化動物整體實驗外包過敏性哮喘模型
      腺相關病毒包裝純化肺炎大鼠模型
      肝炎-肝硬化-肝癌模型
      蛋白芯片原代細胞培養肝纖維化模型
      細胞因子芯片骨髓間充質干細胞培養膽結石模型
      生長因子芯片脂肪干細胞培養急性胰腺炎模型
      信號通路磷酸化水平檢測芯片心肌成纖維細胞培養急性腎衰竭模型
      BioPlex懸浮芯片軟骨細胞培養體內血栓模型
      生長因子芯片血管內皮細胞培養關節炎模型
      炎癥因子芯片神經元細胞培養I型和II型糖尿病模型
      血管生成因子芯片內皮組細胞原代培養裸鼠成瘤
      凋亡因子芯片基因編輯動物
      趨化因子芯片電生理相關服務動物整體實驗服務
      HuProt TM 20K人類蛋白組芯片膜片鉗實驗
      細胞生物學高通量測序代謝組學
      細胞原代培養mRNA測序氣相色譜GC/MS
      MTT檢測LncRNA測序液相色譜LC/MS
      細胞凋亡檢測全基因組測序核磁共震NMR
      細胞周期檢測RNA-Seq測序
      細胞克隆形成實驗外顯子測序影像學相關實驗
      Transwell細胞遷移/侵襲16s擴增子測序Micro-CT
      流式分選Small RNA測序小動物活體成像
      CCK8/XTT檢測宏基因組測序核磁共振
      臺盼藍檢測細胞活性單細胞測序PET-CT
      藥物篩選細胞學實驗circleRNA測序
      細胞粘附性檢測甲基化測序基因編輯動物
      細胞劃痕實驗條件性敲除小鼠/大鼠
      細胞生物學整體實驗全基因敲除小鼠/大鼠
      細胞成管實驗
      病理學檢測CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入基因芯片
      掃描電鏡基因定點突變細胞系LncRNA芯片
      透射電鏡單基因敲除細胞系miRNA芯片
      HE染色多基因敲除細胞系mRNA芯片
      免疫組化目的基因敲入細胞系甲基化芯片(限人和小鼠來源樣本)
      Tunel(原位末端凋亡法)檢測報告基因敲入細胞系SNP芯片(限人和小鼠來源樣本)
      激光共聚焦miRNA/LncRNA敲除細胞系
      免疫熒光
      Masson染色CRISPR/Cas9動物敲除/敲入科研方案設計與SCI相關服務
      原位雜交基因敲除大鼠/小鼠科研文獻論著翻譯
      熒光原位雜交基因敲入大鼠/小鼠SCI論文翻譯潤色服務
      特殊染色(PSA、茜素紅、阿爾新藍等)臨床實驗/科研實驗設計方案指導
      行為學檢測藥物篩選服務項目藥效學評價
      水迷宮實驗高通量自動藥物篩選平臺神經系統藥物藥效學評價
      曠場實驗細胞高內涵藥物篩選平臺抗腫瘤藥物藥效學評價
      重復性刻板行為檢測蛋白質組學靶標研發平臺心血管系統藥物藥效學評價
      動物跑臺檢測分子藥理研究平臺泌尿系統藥物藥效學評價
      強迫游泳生物膜片鉗藥物篩選平臺內分泌系統藥物藥效學評價
      常規藥物體外篩選抗炎免疫藥物藥效學評價




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