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       大鼠顱腦損傷/MCAO模型

      大鼠顱腦損傷/MCAO模型

       

      人類疾病的動物模型在醫學科學研究方面占有十分重要的地位。威斯騰生物動物中心經過十余年的發展,累積了豐富的動物培養和模型構建經驗,在動物模型構建方法上摸索出獨有經驗,常規動物模型構建平均成功率98%以上,重難點模型(開胸/開顱術等)構建平均成功率75%以上,形成了高效高質量的動物模型構建方法庫,可成功構建上百種疾病動物模型。


      大鼠MCAO模型構建

      動物適應性喂養

      動物自購回后保持動物房12h-12h晝夜交替,保持動物自由飲水、進食,溫度23-25℃,適應性喂養一周后進入實驗。

      大鼠MCAO模型構建

      參照改良Zea Longa線栓法構建大鼠MCAO模型。大鼠術前12h禁食不禁水。

      大鼠稱重,7%水合氯醛(0.5ml/100g)腹腔注射麻醉,頸前部備皮、消毒,行頸正中切口,鈍性分離右側皮下組織及肌肉暴露出頸總動脈,眼科鑷小心分離伴行于頸總動脈的迷走神經及動脈周圍粘膜組織,分離出頸總動脈大約1~1.5cm。繼續向頭部分離,小心剔除覆蓋于動脈上方的粘膜組織,可見頸外動脈、頸內動脈與頸總動脈呈“Y字形”分布,游離出獨立的頸內、外動脈。結扎頸外動脈及頸總動脈近心端,頸內動脈埋線并用動脈夾暫時夾閉。在頸總動脈近心端結扎處剪一“V”形切口,用眼科鑷夾持栓線由頸總動脈進入頸內動脈,到達動脈夾時,將埋線稍微拉緊(防止滲血),松開動脈夾,繼續插入栓線,當特制栓線黑色標記處到達Y字形分叉口附近時,此時栓線已進入大腦中動脈且不能繼續前行。

      栓線插入完畢后,將預留的結扎線拉緊固定。醫用棉簽清理頸部血塊,縫合皮膚,酒精棉球消毒,將大鼠放回籠子。90min過后,麻醉大鼠,頸部消毒,打開一個小口,用眼科鑷夾住栓線固定處將栓線拔出約1cm實現血流再灌注,剪去多余栓線,逐層縫合。


      注意事項:

      1)分離頸部肌肉時,兩側小塊肌肉叫鼓泡腺體(很多人誤認為是甲狀腺),避免損傷導致出血。
      2)見到頸動脈鞘了則要注意細致分離迷走神經,若損傷則可能影響其呼吸而死亡的。
      3)分離血管時,要盡量將血管剝離的干凈些,這樣在用眼科剪剪口時就不會誤剪外膜,且要剪一個斜行的切口。
      4)系牢拴線繞在 CCA 遠心端的細線時注意掌握力度,不可不扎,否則出血較多,但不可過緊,否則插線困難
      5)線栓是分幾次一點點插進去的,而不是夾住線栓的中間部分一下子插進去的,直到遇到輕微阻力停止插線。

       

      SD大鼠顱腦損傷模型(Feeney 自由落體法

      實驗鼠稱重,7%水合氯醛麻醉(5ml/kg),頭部備皮,俯臥固定于顱腦損傷儀上。手術區酒精棉球消毒,將大鼠頭頂部皮膚矢狀切開,剝離筋膜。以人字縫前3mm、冠狀縫右側3mm為圓心用顱骨鉆鉆孔并擴大骨窗(直徑5mm),鉆孔過程需注意不能損壞硬腦膜,將致傷撞墊輕輕置于骨窗中央的硬腦膜上,用40g的砝碼自20cm高處沿滑桿自由落體落下打擊撞墊(沖擊力為800g·cm),造成大鼠右頂葉局限性腦挫裂傷。骨蠟封窗,縫合頭皮。

       

      威斯騰實驗服務流程



      威斯騰生物服務項目

      分子生物學檢測蛋白質與免疫學動物實驗
      實時熒光定量PCR單克隆抗體制備帕金森疾病模型
      免疫共沉淀(Co-IP多克隆抗體制備抑郁癥動物模型
      ELISA(酶聯免疫吸附法)技術Western-blot 實驗服務脊髓損傷模型
      生化指標檢測蛋白雙向電泳實驗服務腦外損傷模型
      雙熒光素酶報告基因檢測原核蛋白表達純化骨神經損傷模型
      染色質免疫共沉淀(ChIP真核蛋白表達純化心肌缺血模型
      GST pull DownITRAQ定量蛋白質組學心力衰竭模型
      SLAC蛋白組學肺動脈高血壓動物模型
      高血壓模型
      病毒包裝實驗課題整體外包粥樣動脈硬化模型
      過表達/干擾慢病毒包裝純化整體課題外包大腦中動脈阻塞模型
      過表達/干擾腺病毒包裝純化細胞整體實驗外包慢性之氣管炎模型
      逆轉錄病毒包裝純化動物整體實驗外包過敏性哮喘模型
      腺相關病毒包裝純化肺炎大鼠模型
      肝炎-肝硬化-肝癌模型
      蛋白芯片原代細胞培養肝纖維化模型
      細胞因子芯片骨髓間充質干細胞培養膽結石模型
      BioPlex懸浮芯片脂肪干細胞培養急性胰腺炎模型
      生長因子芯片心肌成纖維細胞培養急性腎衰竭模型
      炎癥因子芯片軟骨細胞培養體內血栓模型
      血管生成因子芯片血管內皮細胞培養關節炎模型
      凋亡因子芯片神經元細胞培養I型和II型糖尿病模型
      趨化因子芯片內皮組細胞原代培養裸鼠成瘤
      HuProt TM 20K人類蛋白組芯片基因編輯動物
      電生理相關服務動物整體實驗服務
      膜片鉗實驗
      細胞生物學檢測高通量測序代謝組學
      細胞原代培養mRNA測序氣相色譜GC/MS
      MTT檢測LncRNA測序液相色譜LC/MS
      細胞凋亡檢測全基因組測序核磁共震NMR
      細胞周期檢測RNA-Seq測序
      細胞克隆形成實驗外顯子測序影像學相關實驗
      Transwell細胞遷移/侵襲16s擴增子測序Micro-CT
      流式分選Small RNA測序小動物活體成像
      CCK8/XTT檢測宏基因組測序核磁共振
      臺盼藍檢測細胞活性單細胞測序PET-CT
      藥物篩選細胞學實驗circleRNA測序
      細胞粘附性檢測甲基化測序基因編輯動物
      細胞劃痕實驗條件性敲除小鼠/大鼠
      細胞生物學整體實驗全基因敲除小鼠/大鼠
      細胞成管實驗
      病理檢測CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入基因芯片
      掃描電鏡基因定點突變細胞系LncRNA芯片
      透射電鏡單基因敲除細胞系miRNA芯片
      HE染色多基因敲除細胞系mRNA芯片
      免疫組化目的基因敲入細胞系甲基化芯片(限人和小鼠來源樣本)
      Tunel(原位末端凋亡法)檢測報告基因敲入細胞系SNP芯片(限人和小鼠來源樣本)
      激光共聚焦miRNA/LncRNA敲除細胞系
      免疫熒光
      Masson染色CRISPR/Cas9動物敲除/敲入科研設計指導&文章評估/潤色
      原位雜交基因敲除大鼠/小鼠科研文獻論著翻譯
      熒光原位雜交基因敲入大鼠/小鼠論文翻譯潤色服務
      特殊染色(PSA、茜素紅、阿爾新藍等)臨床實驗/科研實驗設計方案指導
      行為學檢測藥物篩選服務項目藥效學評價
      曠場實驗高通量自動藥物篩選平臺抗腫瘤藥物藥效學評價
      重復性刻板行為檢測細胞高內涵藥物篩選平臺心血管系統藥物藥效學評價
      動物跑臺檢測蛋白質組學靶標研發平臺泌尿系統藥物藥效學評價
      強迫游泳分子藥理研究平臺內分泌系統藥物藥效學評價
      生物膜片鉗藥物篩選平臺抗炎免疫藥物藥效學評價
      常規藥物體外篩選


      【本平臺合作項目】
      分子生物學、細胞生物學、基因敲出/入、模式動物、SPF動物保種、病理學檢測、免疫學檢測、影像學檢測、原代培養、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩轉株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產權服務! 
      【全國免費熱線】400-675-6758
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