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       轉基因大(小)鼠定制

      轉基因大(小)鼠定制

       

      轉基因大(小)鼠定制最常用的一種方法是DNA原核顯微注射。DNA原核顯微注射是指將外源DNA通過顯微注射的方法注射到受精卵的原核內,注射DNA整合到大鼠受精卵的基因組中,并穩定遺傳給后代。 賽業所使用的PiggyBac系統DNA顯微注射,制備的轉基因鼠基因表達陽性率為常規質粒DNA顯微注射的2倍以上!


      PiggyBac系統技術原理:

       PiggyBac (PB) 系統是利用PB轉座子特有的“剪切和粘貼”機制,使DNA片段在載體和基因組之間“自由”的轉移,從而有效介導外源DNA片段對基因組的整合。轉座時,轉座酶有效的識別特異的轉座子序列(ITRs),與轉座子末端結合形成短暫的發夾結構,“剪切”后脫離,“粘貼”至基因組的TTAA位點。Cyagen實驗數據表明,PiggyBac系統基因表達陽性率為常規質粒DNA顯微注射的2倍以上!


      PiggyBac (PB)系統優勢:

      • 更高的整合效率
      • 更高的目的基因表達概率
      • 更大的目的片段的插入
      • 更“精確”拷貝數的插入
      • 可自由移除插入片段

      轉基因鼠類型

      • 過表達轉基因鼠
      • RNAi轉基因鼠
      • microRNA轉基因鼠 
      • 可誘導性/組織特異性轉基因鼠 
      • BAC轉基因大鼠 

      建系原則與流程

      1、原核顯微注射導入的目的基因是將目的基因隨機整合到大鼠的基因組,因此首代轉基因大鼠(F0)將會有不同的整合位點。整合基因的拷貝數可能在不 同的首代轉基因大(小)鼠定制中也不同。因此,每只F0代鼠需要作為一個獨立的譜系研究,并且與其它F0代鼠分開進行繁殖。由于外源基因一般只整合在二倍體動物的其中 一條染色體上,屬于半合子,其后代只有一部分個體帶有整合的基因,需要進行篩選鑒定。
      2、原核顯微注射獲得PCR陽性F0代雜合子鼠。
      3、F0代鼠達到性成熟后(8周)與野生型鼠進行交配,獲得F1代鼠。
      4、對交配獲得的F1代鼠進行基因型鑒定,理論上,F1代鼠中有50%為轉基因雜合子大鼠,50%為野生型鼠。


      注意事項
      1)每只F0代鼠基因型都不一樣,不能進行F0之間的自交,只能先與野生型交配,篩選出基因型一致的F1。(假如F0代有多個位點的外源基于整合,F1還有可能有多種基因型)。

      2) 獲得F1鼠后,可以進行蛋白表達鑒定,優先篩選出表達的鼠后再進行后續的傳代和保種。


      威斯騰實驗服務流程



      威斯騰生物服務項目

      分子生物學檢測蛋白質與免疫學動物實驗
      實時熒光定量PCR單克隆抗體制備帕金森疾病模型
      免疫共沉淀(Co-IP多克隆抗體制備抑郁癥動物模型
      ELISA(酶聯免疫吸附法)技術Western-blot 實驗服務脊髓損傷模型
      生化指標檢測蛋白雙向電泳實驗服務腦外損傷模型
      雙熒光素酶報告基因檢測原核蛋白表達純化骨神經損傷模型
      染色質免疫共沉淀(ChIP真核蛋白表達純化心肌缺血模型
      GST pull DownITRAQ定量蛋白質組學心力衰竭模型
      SLAC蛋白組學肺動脈高血壓動物模型
      高血壓模型
      病毒包裝實驗課題整體外包粥樣動脈硬化模型
      過表達/干擾慢病毒包裝純化整體課題外包大腦中動脈阻塞模型
      過表達/干擾腺病毒包裝純化細胞整體實驗外包慢性之氣管炎模型
      逆轉錄病毒包裝純化動物整體實驗外包過敏性哮喘模型
      腺相關病毒包裝純化肺炎大鼠模型
      肝炎-肝硬化-肝癌模型
      蛋白芯片原代細胞培養肝纖維化模型
      細胞因子芯片骨髓間充質干細胞培養膽結石模型
      BioPlex懸浮芯片脂肪干細胞培養急性胰腺炎模型
      生長因子芯片心肌成纖維細胞培養急性腎衰竭模型
      炎癥因子芯片軟骨細胞培養體內血栓模型
      血管生成因子芯片血管內皮細胞培養關節炎模型
      凋亡因子芯片神經元細胞培養I型和II型糖尿病模型
      趨化因子芯片內皮組細胞原代培養裸鼠成瘤
      HuProt TM 20K人類蛋白組芯片基因編輯動物
      電生理相關服務動物整體實驗服務
      膜片鉗實驗
      細胞生物學檢測高通量測序代謝組學
      細胞原代培養mRNA測序氣相色譜GC/MS
      MTT檢測LncRNA測序液相色譜LC/MS
      細胞凋亡檢測全基因組測序核磁共震NMR
      細胞周期檢測RNA-Seq測序
      細胞克隆形成實驗外顯子測序影像學相關實驗
      Transwell細胞遷移/侵襲16s擴增子測序Micro-CT
      流式分選Small RNA測序小動物活體成像
      CCK8/XTT檢測宏基因組測序核磁共振
      臺盼藍檢測細胞活性單細胞測序PET-CT
      藥物篩選細胞學實驗circleRNA測序
      細胞粘附性檢測甲基化測序基因編輯動物
      細胞劃痕實驗條件性敲除小鼠/大鼠
      細胞生物學整體實驗全基因敲除小鼠/大鼠
      細胞成管實驗
      病理檢測CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入基因芯片
      掃描電鏡基因定點突變細胞系LncRNA芯片
      透射電鏡單基因敲除細胞系miRNA芯片
      HE染色多基因敲除細胞系mRNA芯片
      免疫組化目的基因敲入細胞系甲基化芯片(限人和小鼠來源樣本)
      Tunel(原位末端凋亡法)檢測報告基因敲入細胞系SNP芯片(限人和小鼠來源樣本)
      激光共聚焦miRNA/LncRNA敲除細胞系
      免疫熒光
      Masson染色CRISPR/Cas9動物敲除/敲入科研設計指導&文章評估/潤色
      原位雜交基因敲除大鼠/小鼠科研文獻論著翻譯
      熒光原位雜交基因敲入大鼠/小鼠論文翻譯潤色服務
      特殊染色(PSA、茜素紅、阿爾新藍等)臨床實驗/科研實驗設計方案指導
      行為學檢測藥物篩選服務項目藥效學評價
      曠場實驗高通量自動藥物篩選平臺抗腫瘤藥物藥效學評價
      重復性刻板行為檢測細胞高內涵藥物篩選平臺心血管系統藥物藥效學評價
      動物跑臺檢測蛋白質組學靶標研發平臺泌尿系統藥物藥效學評價
      強迫游泳分子藥理研究平臺內分泌系統藥物藥效學評價
      生物膜片鉗藥物篩選平臺抗炎免疫藥物藥效學評價
      常規藥物體外篩選

      【本平臺合作項目】
      分子生物學、細胞生物學、基因敲出/入、模式動物、SPF動物保種、病理學檢測、免疫學檢測、影像學檢測、原代培養、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩轉株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產權服務! 
      【全國免費熱線】400-675-6758
      【電話】 023-65316016,023-65316556
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      【官網網址】www.5002688.com
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