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       大白兔/大鼠膝關節軟骨細胞

      新西蘭大白兔/大鼠膝關節軟骨細胞

       

      威斯騰生物經過10多年的發展,獲得了上百種細胞株和四十余種原代細胞培養經驗,并建立了龐大的細胞庫及原代培養資料庫。細胞平臺有資深實驗員、規范的SOP操作文件,萬級凈化細胞房,這些條件為保質保量完成每個客戶的實驗提供了保障。 同時,威斯騰生物結合多年原代及傳代細胞培養經驗,結合平臺已有的技術優勢,建立了完善的體外藥篩實驗,并引進RTCA(Real-time cellular Analysis,實時無標記細胞記錄儀),在藥篩過程中,全程實時記錄細胞真實狀況,為藥篩提供最真實精準的實驗數據。

      無菌操作注意事項

      細胞培養一定要保持工作區的無菌清潔,先用紫外燈和臭氧殺菌1h,然后通風30min,操作前需要換細胞間專用拖鞋,雙手帶上一次性橡膠手套并用75%乙醇消毒,穿上實驗服,戴上一次性口罩和帽子,操作時不能大聲說話,整個無菌操作都應該在酒精燈的周圍進行。

       

      新西蘭大白兔膝關節軟骨細胞原代分離培養 

      操作方法 

      (1)取成年新西蘭大白兔,耳緣靜脈注射空氣處死后,取下兔子的雙腿,立即用75%乙醇浸泡。

      (2)移入細胞房內,去除雙腿表面的皮毛及肌肉,剪取關節段,移至超菌工作臺內。

      (3)PBS洗滌數次,用手術刀或彎剪將關節表面的軟骨組織取下。

      (4)軟骨組織塊靜置5min,棄去上層液體及懸浮組織,將軟骨組織剪成1mm3的大小。移到離心管中加3倍體積的0.25%胰蛋白酶,置入37℃的恒溫搖床中,振蕩消化15-20min;

      (5) 4℃靜置5min;棄上清,PBS洗滌,去上清。加入0.2%膠原酶II,置入37℃的恒溫搖床中,振蕩消化2H;
      (6)加入生長培養基終止消化,反復吹打后依次通過200目濾網。收集濾液,1200rpm離心8min,棄上清,用DMEM完全培養基重新懸浮細胞, 放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養;

      (7)細胞傳代后放入預置有薄骨片或蓋玻片的培養板中進行培養。細胞完全展開后即可固定做原代鑒定。

      細胞形態

      膝關節軟骨原代培養過程中,約24小時即可出現貼壁生長,細胞三角或多角形,生長緩慢,培養3-5天進入快速增殖期。


      大鼠膝關節軟骨細胞的原代培養

       操作方法

      (1)取四周齡SD大鼠,頸椎脫臼法處死后立即用75%乙醇浸泡,移入超凈工作臺內,用大頭針固定大鼠四肢于工作臺面的泡沫板上。

      (2)碘酒擦拭四肢,再用酒精棉球擦拭,無菌條件下用滅菌消毒后的鑷子和剪刀分離大腿腿骨,盡可能去除筋膜、肌肉和結締組織;從關節處分離出軟骨組織,將其剪成小于1mm3的組織塊,用含雙抗的PBS溶液沖洗兩遍。

      (3)軟骨組織塊靜置5min,棄去上層液體及懸浮組織,往離心管中加3倍體積的0.25%胰蛋白酶,置入37℃的恒溫搖床中,振蕩消化15-20min;

      (4) 4℃靜置5min;棄上清,加入0.2%膠原酶II,置入37℃的恒溫搖床中,振蕩消化30~60min;
      (5)加入生長培養基終止消化,反復吹打后依次通過200目濾網。收集濾液,1200rpm離心8min,棄上清,用DMEM完全培養基重新懸浮細胞, 放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養;

      (7)放入預置有薄骨片或蓋玻片的培養板中進行培養。每3天更換培養液至第5天改為無血清培養液。免疫組化鑒定原代細胞。

      細胞形態

      膝關節軟骨原代培養過程中,約24小時即可出現貼壁生長,細胞三角或多角形,生長緩慢,培養3-5天進入快速增殖期。



      威斯騰實驗服務流程



      威斯騰生物服務項目

      細胞生物學檢測高通量測序代謝組學
      細胞原代培養mRNA測序氣相色譜GC/MS
      MTT檢測LncRNA測序液相色譜LC/MS
      細胞凋亡檢測全基因組測序核磁共震NMR
      細胞周期檢測RNA-Seq測序
      細胞克隆形成實驗外顯子測序影像學相關實驗
      Transwell細胞遷移/侵襲16s擴增子測序Micro-CT
      流式分選Small RNA測序小動物活體成像
      CCK8/XTT檢測宏基因組測序核磁共振
      臺盼藍檢測細胞活性單細胞測序PET-CT
      藥物篩選細胞學實驗circleRNA測序
      細胞粘附性檢測甲基化測序基因編輯動物
      細胞劃痕實驗條件性敲除小鼠/大鼠
      細胞生物學整體實驗全基因敲除小鼠/大鼠
      細胞成管實驗
      病理檢測CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入基因芯片
      掃描電鏡基因定點突變細胞系LncRNA芯片
      透射電鏡單基因敲除細胞系miRNA芯片
      HE染色多基因敲除細胞系mRNA芯片
      免疫組化目的基因敲入細胞系甲基化芯片(限人和小鼠來源樣本)
      Tunel(原位末端凋亡法)檢測報告基因敲入細胞系SNP芯片(限人和小鼠來源樣本)
      激光共聚焦miRNA/LncRNA敲除細胞系
      免疫熒光
      Masson染色CRISPR/Cas9動物敲除/敲入科研設計指導&文章評估/潤色
      原位雜交基因敲除大鼠/小鼠科研文獻論著翻譯
      熒光原位雜交基因敲入大鼠/小鼠論文翻譯潤色服務
      特殊染色(PSA、茜素紅、阿爾新藍等)臨床實驗/科研實驗設計方案指導
      行為學檢測藥物篩選服務項目藥效學評價
      曠場實驗高通量自動藥物篩選平臺抗腫瘤藥物藥效學評價
      重復性刻板行為檢測細胞高內涵藥物篩選平臺心血管系統藥物藥效學評價
      動物跑臺檢測蛋白質組學靶標研發平臺泌尿系統藥物藥效學評價
      強迫游泳分子藥理研究平臺內分泌系統藥物藥效學評價
      生物膜片鉗藥物篩選平臺抗炎免疫藥物藥效學評價
      常規藥物體外篩選

      【本平臺合作項目】
      分子生物學、細胞生物學、基因敲出/入、模式動物、SPF動物保種、病理學檢測、免疫學檢測、影像學檢測、原代培養、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩轉株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產權服務! 
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