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       人眼眶/大鼠心肌成纖維細胞

      人眼眶/大鼠心肌成纖維細胞

       

      威斯騰生物經過10多年的發展,獲得了上百種細胞株和四十余種原代細胞培養經驗,并建立了龐大的細胞庫及原代培養資料庫。細胞平臺有資深實驗員、規范的SOP操作文件,萬級凈化細胞房,這些條件為保質保量完成每個客戶的實驗提供了保障。 同時,威斯騰生物結合多年原代及傳代細胞培養經驗,結合平臺已有的技術優勢,建立了完善的體外藥篩實驗,并引進RTCA(Real-time cellular Analysis,實時無標記細胞記錄儀),在藥篩過程中,全程實時記錄細胞真實狀況,為藥篩提供最真實精準的實驗數據。

      無菌操作注意事項

      細胞培養一定要保持工作區的無菌清潔,先用紫外燈和臭氧殺菌1h,然后通風30min,操作前需要換細胞間專用拖鞋,雙手帶上一次性橡膠手套并用75%乙醇消毒,穿上實驗服,戴上一次性口罩和帽子,操作時不能大聲說話,整個無菌操作都應該在酒精燈的周圍進行。


      甲狀腺相關性眼病患的眼眶成纖維細胞原代培養 

      (1)無菌條件下,取出結締組織(人眼眶結締組織,重慶醫科大學附屬第二醫院提供)后在含2×雙抗的預冷的PBS中洗3次。

      (2)在PBS中除去脂肪組織,將結締組織剪成約2mm2小塊。

      (3)用完全培養基將細胞培養板潤洗一遍,待組織稍干后小心貼于細胞培養板上。

      (4)將貼有組織的細胞培養板置于細胞培養箱中倒置30min,使組織盡快貼壁。

      (5)30min后將完全培養基加入細胞培養板中,剛好沒過組織即可,培養數天。

      (6)3d后半量換液,隔日觀察細胞爬出情況并添加培養基。

      約8d后有細胞爬出。

       

      大鼠心肌成纖維細胞原代分離培養

      1SD乳鼠在75%酒精中浸泡1-5min,然后固定在泡沫板上,先用碘酒消毒胸腹部,再用酒精消毒。取出無菌剪刀和鑷子,先用酒精棉球再次消毒,剪開胸,取心尖部位,快速置于含雙抗的預冷的PBS溶液潤洗3遍。

      (2)剔除周圍結締組織,將心臟置于無菌平皿中,將心臟盡量剪碎,平皿內加入適量0.125%的胰酶,在37度培養箱中,采用分次消化,每次消化5分鐘,一共消化8~10次。

      (3)每次消化后取上清液,并加入等量的含10%的DMEM/F12培養基,輕輕混勻,中和胰酶的消化,防止消化多度。用100目細胞過濾篩子過濾含細胞的混合液,最后將過濾后的細胞懸液1000R/MIN離心5分鐘。離心后收集沉淀,用PBS再次重復離心3次。用細胞培養基將細胞沉淀重懸。于細胞培養瓶中培養。

      (4)在培養90分鐘左右,將未貼壁的細胞懸液吸出。此時已經貼壁的是心肌成纖維細胞,加入DMEM/F12培養基,放入培養瓶繼續培養。

      (5)24h換液,并每日觀察心肌成纖維細胞的生長。


      人眼眶/大鼠心肌成纖維細胞

      威斯騰實驗服務流程



      威斯騰生物服務項目

      細胞生物學檢測高通量測序代謝組學
      細胞原代培養mRNA測序氣相色譜GC/MS
      MTT檢測LncRNA測序液相色譜LC/MS
      細胞凋亡檢測全基因組測序核磁共震NMR
      細胞周期檢測RNA-Seq測序
      細胞克隆形成實驗外顯子測序影像學相關實驗
      Transwell細胞遷移/侵襲16s擴增子測序Micro-CT
      流式分選Small RNA測序小動物活體成像
      CCK8/XTT檢測宏基因組測序核磁共振
      臺盼藍檢測細胞活性單細胞測序PET-CT
      藥物篩選細胞學實驗circleRNA測序
      細胞粘附性檢測甲基化測序基因編輯動物
      細胞劃痕實驗條件性敲除小鼠/大鼠
      細胞生物學整體實驗全基因敲除小鼠/大鼠
      細胞成管實驗
      病理檢測CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入基因芯片
      掃描電鏡基因定點突變細胞系LncRNA芯片
      透射電鏡單基因敲除細胞系miRNA芯片
      HE染色多基因敲除細胞系mRNA芯片
      免疫組化目的基因敲入細胞系甲基化芯片(限人和小鼠來源樣本)
      Tunel(原位末端凋亡法)檢測報告基因敲入細胞系SNP芯片(限人和小鼠來源樣本)
      激光共聚焦miRNA/LncRNA敲除細胞系
      免疫熒光
      Masson染色CRISPR/Cas9動物敲除/敲入科研設計指導&文章評估/潤色
      原位雜交基因敲除大鼠/小鼠科研文獻論著翻譯
      熒光原位雜交基因敲入大鼠/小鼠論文翻譯潤色服務
      特殊染色(PSA、茜素紅、阿爾新藍等)臨床實驗/科研實驗設計方案指導
      行為學檢測藥物篩選服務項目藥效學評價
      曠場實驗高通量自動藥物篩選平臺抗腫瘤藥物藥效學評價
      重復性刻板行為檢測細胞高內涵藥物篩選平臺心血管系統藥物藥效學評價
      動物跑臺檢測蛋白質組學靶標研發平臺泌尿系統藥物藥效學評價
      強迫游泳分子藥理研究平臺內分泌系統藥物藥效學評價
      生物膜片鉗藥物篩選平臺抗炎免疫藥物藥效學評價
      常規藥物體外篩選


      【本平臺合作項目】
      分子生物學、細胞生物學、基因敲出/入、模式動物、SPF動物保種、病理學檢測、免疫學檢測、影像學檢測、原代培養、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩轉株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產權服務! 
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