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       小鼠海馬/大鼠脊髓神經元細胞

      小鼠海馬/大鼠脊髓神經元細胞


      威斯騰生物經過10多年的發展,獲得了上百種細胞株和四十余種原代細胞培養經驗,并建立了龐大的細胞庫及原代培養資料庫。細胞平臺有資深實驗員、規范的SOP操作文件,萬級凈化細胞房,這些條件為保質保量完成每個客戶的實驗提供了保障。 同時,威斯騰生物結合多年原代及傳代細胞培養經驗,結合平臺已有的技術優勢,建立了完善的體外藥篩實驗,并引進RTCA(Real-time cellular Analysis,實時無標記細胞記錄儀),在藥篩過程中,全程實時記錄細胞真實狀況,為藥篩提供最真實精準的實驗數據。

      無菌操作注意事項

      細胞培養一定要保持工作區的無菌清潔,先用紫外燈和臭氧殺菌1h,然后通風30min,操作前需要換細胞間專用拖鞋,雙手帶上一次性橡膠手套并用75%乙醇消毒,穿上實驗服,戴上一次性口罩和帽子,操作時不能大聲說話,整個無菌操作都應該在酒精燈的周圍進行。


      小鼠海馬神經元細胞的原代分離培養

      1、培養板的包被

      用0.01%的 L-多聚賴氨酸溶液包被培養板和小玻片,37℃恒溫孵育 4h 或常溫過夜。 

      吸棄 L-多聚賴氨酸溶液,滅菌去離子水漂洗培養孔及小玻片,晾干備用。 

      2、小鼠海馬神經元細胞的分離及培養 

      (1)75%(體積分數)酒精消毒新生24h內的健康C57小鼠,在無菌條件下脫頸處死,剪開頭皮及顱骨,取出腦組織,置于盛冷的pH7.2,無鈣、鎂的D-Hank's液的平皿中(下置冰袋)。

      (2)無菌分離海馬組織。保持腦組織背面朝上,在鏡下小心翻開大腦皮質,暴露海馬,用眼科剪或尖鑷分離海馬周圍組織,取出放入盛有D-Hank's液的平皿中。

      (3)用虹膜剪將組織剪切成1mm3左右的組織塊,0.125%胰蛋白酶消化,37℃作用 20min,期間振搖 2~3 次。

      (4)棄去上清液,加入完全接種液終止消化,漂洗2次。巴斯德吸管輕輕吹打 20次,制成細胞懸液,靜置 2min。

      (5)懸液收集于新的離心管,離心(1000rpm,10 min,4℃),棄去上清液。加入完全培養液重懸,200 目不銹鋼網過濾。

      (6)將濾液進行臺盼藍拒染試驗,血細胞計數板鏡下計數。以 8.0 ×104至 1.0 ×105/mL的密度將細胞以400μL/孔接種到預先用L-多聚賴氨酸包被的24孔培養板或 100μL/孔接種 96 孔培養板。

      (7)置 37℃、5%CO2培養箱培養 4-6h,全量更換為無血清培養液。

      (8)體外培養第3d,加入Ara-C-工作液,以抑制非神經細胞過度增殖,作用 24 h后吸出。

      (9)此后每 3d半量換液1次 , 體外培養第 7~21d的細胞用于實驗。


      大鼠脊髓神經元細胞的分離及培養

      1、培養板的包被

      (1)將蓋玻片裁成 0.5cm×0.5cm 大小,洗潔精浸洗、烘干。

      (2)經 5%鹽酸浸泡30min,自來水沖洗20min,三蒸水沖洗,浸泡過夜并烘干;移入 95%酒精浸泡保存。用前酒精燈烤干,放入 24 孔細胞培養板。

      (3)用 0.01%的 L-多聚賴氨酸溶液包被培養皿和小玻片,37℃恒溫孵育 4h 或常溫過夜。

      吸棄 L-多聚賴氨酸溶液,滅菌去離子水漂洗培養孔及小玻片,晾干備用。

      2、大鼠脊髓神經元細胞的分離及培養

       (1) 75%(體積分數)酒精消毒新生 24h 內的健康SD大鼠,在無菌條件下斷頭,分離并切取脊髓,置于盛冷的pH7.2,無鈣、鎂的D-Hank's液的平皿中(下置冰袋)。

      (2) 無菌條件下仔細剝離脊膜及血管。

      (3) 用虹膜剪將組織剪切成 1mm3左右的組織塊,0.125%胰蛋白酶消化,37℃作用 10min,期間振搖 2~3 次。

      (4)巴斯德吸管輕輕吹打 20次,靜置 5min,將細胞上清移入新的無菌離心管,加入完全接種液終止消化。剩余組織按照上述步驟繼續消化,重復2-3次,制成細胞懸液。

      (5)將新的離心管中細胞懸液,離心(1000r/min,10 min,4℃),棄去上清液。加入完全培養液重懸,200 目不銹鋼網過濾。

      (6)將濾液進行臺盼藍拒染試驗,血細胞計數板鏡下計數。以 8.0 ×104至 1.0 ×105/mL的密度將細胞以 400μl/孔接種到預先用L-多聚賴氨酸包被的24 孔培養板

      (7)置 37℃、5%CO2培養箱培養 4~6h,全量更換為無血清培養液。

      (8)體外培養第 3天,加入Ara-C 工作液,以抑制非神經細胞過度增殖,作用 24 h后吸出。

      (9) 此后每 3d半量換液1次 , 體外培養第 7~21天的細胞用于實驗。


      威斯騰實驗服務流程


      威斯騰生物服務項目

      細胞生物學檢測高通量測序代謝組學
      細胞原代培養mRNA測序氣相色譜GC/MS
      MTT檢測LncRNA測序液相色譜LC/MS
      細胞凋亡檢測全基因組測序核磁共震NMR
      細胞周期檢測RNA-Seq測序
      細胞克隆形成實驗外顯子測序影像學相關實驗
      Transwell細胞遷移/侵襲16s擴增子測序Micro-CT
      流式分選Small RNA測序小動物活體成像
      CCK8/XTT檢測宏基因組測序核磁共振
      臺盼藍檢測細胞活性單細胞測序PET-CT
      藥物篩選細胞學實驗circleRNA測序
      細胞粘附性檢測甲基化測序基因編輯動物
      細胞劃痕實驗條件性敲除小鼠/大鼠
      細胞生物學整體實驗全基因敲除小鼠/大鼠
      細胞成管實驗
      病理檢測CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入基因芯片
      掃描電鏡基因定點突變細胞系LncRNA芯片
      透射電鏡單基因敲除細胞系miRNA芯片
      HE染色多基因敲除細胞系mRNA芯片
      免疫組化目的基因敲入細胞系甲基化芯片(限人和小鼠來源樣本)
      Tunel(原位末端凋亡法)檢測報告基因敲入細胞系SNP芯片(限人和小鼠來源樣本)
      激光共聚焦miRNA/LncRNA敲除細胞系
      免疫熒光
      Masson染色CRISPR/Cas9動物敲除/敲入科研設計指導&文章評估/潤色
      原位雜交基因敲除大鼠/小鼠科研文獻論著翻譯
      熒光原位雜交基因敲入大鼠/小鼠論文翻譯潤色服務
      特殊染色(PSA、茜素紅、阿爾新藍等)臨床實驗/科研實驗設計方案指導
      行為學檢測藥物篩選服務項目藥效學評價
      曠場實驗高通量自動藥物篩選平臺抗腫瘤藥物藥效學評價
      重復性刻板行為檢測細胞高內涵藥物篩選平臺心血管系統藥物藥效學評價
      動物跑臺檢測蛋白質組學靶標研發平臺泌尿系統藥物藥效學評價
      強迫游泳分子藥理研究平臺內分泌系統藥物藥效學評價
      生物膜片鉗藥物篩選平臺抗炎免疫藥物藥效學評價
      常規藥物體外篩選

      【本平臺合作項目】
      分子生物學、細胞生物學、基因敲出/入、模式動物、SPF動物保種、病理學檢測、免疫學檢測、影像學檢測、原代培養、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩轉株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產權服務! 
      【全國免費熱線】400-675-6758
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