1. <th id="6gpvd"></th>
      <strike id="6gpvd"></strike>
      <th id="6gpvd"><video id="6gpvd"></video></th>
      <strike id="6gpvd"></strike>
       CRISPR/Cas9 基因敲除技術

      CRISPR/Cas9 基因敲除技術


          CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats),即成簇規律間隔的短回文重復序列,是細菌和古細菌為應對病毒和質粒不斷攻擊而演化來的獲得性免疫防御機制,廣泛存在于眾多原核生物基因中,其中II型為CRISPR/Cas免疫系統,依賴Cas9內切酶家族靶向和剪切外源DNA。

          Cas9蛋白是一種能夠降解DNA分子的核酸酶(nuclease),其中含有兩個酶切活性位點,每一個位點負責切割DNA雙螺旋中的一條鏈。CRISPR在大約40%的細菌和90%的古細菌(archaea)的基因組中均有存在,它依賴crRNA (CRISPR RNA能夠與tracrRNA配對,形成雙鏈RNA結構,這種雙鏈RNA分子能夠介導Cas9核酸內切酶對與雙鏈RNA分子互補結合的DNA序列進行切割) 和tracrRNA (trans-activating chimeric RNA, 即反式激活嵌合RNA,一種非編碼RNA,能夠促進 crRNA的形成,是Cas9蛋白發揮RNA介導的DNA切割作用必不可少的輔助因子)對外源DNA進行特異的識別,然后使用Cas9對外源DNA進行序列特異性地切割降解,從在細菌和古細菌細胞發揮了一種獲得性免疫的作用。


          CRISPR系統間區序列的多樣性和特異性已被廣泛應用于基因分型、流行病學研究、分析不同人體內的細菌菌群差異、檢測環境中的噬菌體等科學研究。利用CRISPR系統作用機制的獨特性用于構建噬菌體抗性的工業生產菌株。CRISPR系統還可能廣泛應用于:作為遺傳操作的工具,用于靶向基因沉默;rRNA-Cascade復合物可用于體外DNA、RNA分子的位點特異性切割;在臨床上,通過限制質粒結合轉移而控制藥物抗性基因在致病菌之間擴散等。最近有多項研均表明,RNA介導的Cas9系統可以被用于對人類和小鼠細胞,以及細菌或斑馬魚胚胎進行基因組改造的工作當中( Martin et al. Science.2012;Mali P,Science.2013;Cong L,Science.2013)。

      與其它基因組工程技術比較,CRISPR/Cas9技術擁有以下技術優勢:

          (1) 無物種限制,靶向精確性更高,可實現對靶基因多個位點同時敲除;

          (2)  使用更方便,費用更低:Cas蛋白不具特異性,只需合成一個sgRNA就能實現對基因的特異性修飾。

          (3) CRISPR/Cas9系統可避免超長、高度重復的TALENs編碼載體帶來的并發癥。

          威斯騰生物Cas9團隊成立于2011年,目前擁有利用TALEN和CRISPR/Cas9技術完成細菌基因的敲除/敲入、細胞基因的敲除/敲入、動物個體(大小鼠、豬等模式動物)的基因敲除/敲入等先進技術手段,曾為全國各科研院所及中科院系統提供CRISPR/Cas9技術相關服務,完成40余例動物個體基因敲除。威斯騰生物戰略合作平臺——美國國立衛生研究院(National Institutes of Health,NIH),團隊成員曾于Nature等國際一流科研雜志發表大量CRISPR/Cas9相關研究成果。威斯騰生物始終緊跟相關領域前沿技術,立志為國內所有科研人員提供最先進的技術服務以及產業化合作。

       

      服務流程




      本平臺可制備的動物模型(部分)


      疾病方法動物模型成功率操作難度耗時程度
      帕金森疾病6-OHDA腦立體定位注射Rat70%~80%簡單比較耗時
      MPTP、IP或SC注射(急性or慢性)Mouse70%簡單快速
      抑郁癥禁食、禁水、夾尾、冰水等慢性不可知刺激Rat80%簡單非常耗時
      利血平藥物注射或者懸尾和強迫游泳Mouse60%簡單非常耗時
      脊髓損傷脊髓半切、全斷、牽張、擠壓、打擊等Rat80%普通非常耗時
      腦外損傷顱腦損傷儀打擊致損Rat80%普通比較耗時
      坐骨神經損傷
      (周圍神經損傷)
      切斷或者夾閉神經(手術)Rat90%簡單一般
      心肌缺血心臟冠狀動脈左前降支結扎Rat60%~70%較難非常耗時
      心力衰竭腹主動脈縮窄手術致心力衰竭Rat90%簡單快速
      肺動脈高壓手術分流術和MCT IP或SC注射Rat80%普通一般
      高血壓單腎單夾腎血管或者兩腎一夾型腎血管Rat80%簡單快速
      粥樣動脈硬化高脂飲食+VD3喂養Rat/Mouse50%簡單非常耗時
      大腦中動脈阻塞(MCAO)線栓法制備Rat 70%普通比較耗時
      慢性支氣管炎煙熏Rat80%簡單耗時
      過敏性哮喘OVA+氫氧化鋁致敏Rat/Mouse80%普通耗時
      肺炎模型鮑曼不動桿菌氣道滴注Rat/Mouse90%簡單快速
      肝炎—肝硬化—肝癌DEN誘導Rat80%簡單比較耗時
      肝纖維化CCL4誘導Rat80%簡單耗時
      膽結石模型喂養致石飼料Mouse90%簡單一般
      急性胰腺炎牛黃膽酸鈉胰膽管注射Rat90%普通快速
      急性腎衰竭順鉑尾靜脈注射/腎動脈缺血Rat80%普通一般
      體內血栓手術或者藥物誘導Mouse60-70%普通比較耗時
      關節炎模型Ⅱ型膠原+佐劑誘導Rat/Mouse90%簡單一般
      Ⅰ型和Ⅱ型糖尿病STZ或增加高脂飼料喂養藥物誘導Rat/Mouse80%簡單比較耗時
      荷瘤鼠/裸鼠成瘤皮下成瘤BALB/cA-nu mice90%簡單一般
      更多動物模型敬請咨詢

       

      【本平臺合作項目】

      分子生物學、細胞生物學、病理染色檢測、細胞敲除&敲入、模式與轉基因動物、SPF動物保種、免疫學檢測、影像學檢測、原代培養、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩轉株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產權服務!

      【全國免費熱線】:400-675-6758

      【電話】 023-65316016,023-65316556

      【郵箱】 china-western@163.com

      【官網網址】www.5002688.com

      【地址】 重慶市高新區二郎創業大道高科創業園D棟2樓

      时时中彩票app