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       慢病毒包裝

      慢病毒包裝

      慢病毒(Lentivirus )載體是以HIV-1 (人類免疫缺陷I 型病毒)為基礎發展起來的基因治療載體。區別一般的逆轉錄病毒,它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力,因此它可以有效地感染包括神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內皮細胞、干細胞等在內的幾乎所有的哺乳動物細胞,并且感染效率非常高,是傳統方法的數倍甚至數十倍。慢病毒可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達,是目前最受歡迎的基因功能研究工具。慢病毒的研究發展很快,也很深入,在美國已經開展了臨床研究,效果非常理想,預示著慢病毒有著廣闊的應用前景。現在慢病毒系統已經被廣泛應用到各種細胞系的基因過表達、RNA干擾、microRNA研究以及活體動物實驗中。

      一、慢病毒系統組成
      1、一個表達載體,含有目的基因、目的基因的啟動子以及其它病毒包裝所需的必要元件;
      2、一套包含三個輔助質粒的包裝質粒Mix,分別表達產生病毒所需的結構蛋白和逆轉錄酶;
      3、293FT 細胞株,能夠在表達載體和包裝質粒mix 共轉染后包裝出慢病毒。

      二、慢病毒系統優勢
      1、生產出以HIV-1 為基礎的慢病毒,它能有效地轉導分裂和非分裂的哺乳動物細胞,因此它的應用潛能超過傳統的以MLV 為基礎的逆轉錄系統。
      2、無論靶細胞是在體內還是體外培養,慢病毒都能有效地將外源基因攜帶進去。相比傳統腺病毒的瞬時轉染,慢病毒能夠將目的基因整合到宿主基因組,從而能夠長期穩定地表達。
      3、宿主非常廣泛,包括人、猩猩、小鼠、大鼠、兔、狗等所有已經研究過的哺乳動物。
      4、表達載體和包裝質粒形成反式互補,且包裝質粒又分別由三個質粒構成,從而為安全性提供了更加可靠的保障。

      三、慢病毒服務項目:

      威斯騰生物提供慢病毒載體構建、RNAi(shRNA)、miRNA、過表達和干擾慢病毒包裝以及基于慢病毒技術的穩定細胞系構建服務。

      四、過表達或者干擾慢病毒包裝操作步驟:

      1、目的基因獲取(注:客戶提供基因ID)或者針對目的基因設計合成shRNA;

      2、選擇符合要求的載體;

      3、構建過表達慢病毒載體或者shRNA載體測序驗證;
      4. 對于測序正確的重組質粒,提取和純化高質量(不含內毒素)的重組質粒;
      5. 使用高效重組載體和慢病毒包裝質粒共轉染293T 細胞,進行病毒包裝并收集上清液;
      6. 通過超濾和超速離心濃縮和純化病毒;
      7. 使用病毒液感染293T細胞,測定病毒滴度。

      五、結果提供:

      產品名稱

      病毒滴度

      規  格

      免費提供陰性對照規格

      過表達慢病毒

      ≥1*10^8TU/ml

      1ml

      1ml(≥1*10^8TU/ml)

      RNAi慢病毒

      ≥1*10^8TU/ml

      1ml

      1ml(≥1*10^8TU/ml)

      慢病毒、腺病毒、逆轉錄病毒載體系統之間的比較


      七、服務流程


      八、服務項目

       

      分子生物學類蛋白質與免疫學動物實驗
      實時熒光定量PCR單克隆抗體制備帕金森疾病模型
      免疫共沉淀(Co-IP)多克隆抗體制備抑郁癥動物模型
      ELISA(酶聯免疫吸附法)技術Western-blot 實驗服務脊髓損傷模型
      生化指標檢測蛋白雙向電泳實驗服務腦外損傷模型
      雙熒光素酶報告基因檢測原核蛋白表達純化骨神經損傷模型
      染色質免疫共沉淀(ChIP)真核蛋白表達純化心肌缺血模型
      GST pull DownITRAQ定量蛋白質組學心力衰竭模型
      SLAC蛋白組學肺動脈高血壓動物模型
      高血壓模型
      病毒類實驗課題整體外包粥樣動脈硬化模型
      過表達/干擾慢病毒包裝純化整體課題外包大腦中動脈阻塞模型
      過表達/干擾腺病毒包裝純化細胞整體實驗外包慢性之氣管炎模型
      逆轉錄病毒包裝純化動物整體實驗外包過敏性哮喘模型
      腺相關病毒包裝純化肺炎大鼠模型
      肝炎-肝硬化-肝癌模型
      蛋白芯片原代細胞培養肝纖維化模型
      細胞因子芯片骨髓間充質干細胞培養膽結石模型
      生長因子芯片脂肪干細胞培養急性胰腺炎模型
      信號通路磷酸化水平檢測芯片心肌成纖維細胞培養急性腎衰竭模型
      BioPlex懸浮芯片軟骨細胞培養體內血栓模型
      生長因子芯片血管內皮細胞培養關節炎模型
      炎癥因子芯片神經元細胞培養I型和II型糖尿病模型
      血管生成因子芯片內皮組細胞原代培養裸鼠成瘤
      凋亡因子芯片基因編輯動物
      趨化因子芯片電生理相關服務動物整體實驗服務
      HuProt TM 20K人類蛋白組芯片膜片鉗實驗
      細胞生物學高通量測序代謝組學
      細胞原代培養mRNA測序氣相色譜GC/MS
      MTT檢測LncRNA測序液相色譜LC/MS
      細胞凋亡檢測全基因組測序核磁共震NMR
      細胞周期檢測RNA-Seq測序
      細胞克隆形成實驗外顯子測序影像學相關實驗
      Transwell細胞遷移/侵襲16s擴增子測序Micro-CT
      流式分選Small RNA測序小動物活體成像
      CCK8/XTT檢測宏基因組測序核磁共振
      臺盼藍檢測細胞活性單細胞測序PET-CT
      藥物篩選細胞學實驗circleRNA測序
      細胞粘附性檢測甲基化測序基因編輯動物
      細胞劃痕實驗條件性敲除小鼠/大鼠
      細胞生物學整體實驗全基因敲除小鼠/大鼠
      細胞成管實驗
      病理類CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入基因芯片
      掃描電鏡基因定點突變細胞系LncRNA芯片
      透射電鏡單基因敲除細胞系miRNA芯片
      HE染色多基因敲除細胞系mRNA芯片
      免疫組化目的基因敲入細胞系甲基化芯片(限人和小鼠來源樣本)
      Tunel(原位末端凋亡法)檢測報告基因敲入細胞系SNP芯片(限人和小鼠來源樣本)
      激光共聚焦miRNA/LncRNA敲除細胞系
      免疫熒光
      Masson染色CRISPR/Cas9動物敲除/敲入科研方案設計與SCI相關服務
      原位雜交基因敲除大鼠/小鼠科研文獻論著翻譯
      熒光原位雜交基因敲入大鼠/小鼠SCI論文翻譯潤色服務
      特殊染色(PSA、茜素紅、阿爾新藍等)臨床實驗/科研實驗設計方案指導
      行為學檢測藥物篩選服務項目藥效學評價
      水迷宮實驗高通量自動藥物篩選平臺神經系統藥物藥效學評價
      曠場實驗細胞高內涵藥物篩選平臺抗腫瘤藥物藥效學評價
      重復性刻板行為檢測蛋白質組學靶標研發平臺心血管系統藥物藥效學評價
      動物跑臺檢測分子藥理研究平臺泌尿系統藥物藥效學評價
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